Title
Authors
Abstract
Adriana, Arévalo1;María Luz, Gunturiz2; Sofía Duque1
Instituto Nacional de Salud, Dirección de Investigación en Salud Pública, Subdirección de Investigación Científica y Tecnológica
Grupo Parasitología1
Grupo Fisiología Molecular2
aarevalo@ins.gov.co
Introducción/ Objetivos
La giardiasis es un problema de salud pública que afecta a millones de personas en especial a niños ocasionándoles problemas de crecimiento, malnutrición y cognitivos, especialmente en países con deficiencia sanitaria y asociadas a situaciones de pobreza.
El formol es comúnmente utilizado como preservante de parásitos intestinales garantizando su identificación en cualquier período de tiempo pos-preservación.
El objetivo del presente trabajo consistió en implementar un protocolo de extracción de ADN de Giardia a partir de materia fecal preservada en formol al 5% y su detección utilizando PCR convencional.
Materiales y Métodos
Se utilizaron muestras de materia fecal, preservadas en formol al 5%, del Banco de muestras del Instituto Nacional de Salud, las cuales tenían únicamente quistes de Giardia. Se purificaron los quistes mediante gradiente de sacarosa, se congelaron en nitrógeno líquido y se descongelaron en baño de maría a 60oC por tres veces consecutivas. Se extrajo ADN de Giardia usando el mini StoolQuiagen® siguiendo las instrucciones del instructivo. Se midió la concentración de ADN en nanodrop®, se realizó PCR convencional utilizando como iniciadores la β-giardina.
Resultados
Se obtuvo una concentración de ADN de Giardia de 13.5ng/µl y posterior al PCR convencional se identificó una banda nítida de 264pb correspondiente a β-giardina característica de Giardia.
Conclusiones
Estos resultados son promisorios dado que permitirán recolectar muestras de materia fecal de diferentes zonas del país preservadas en formol al 5% para realizar diagnóstico parasitológico, estudios de epidemiología molecular de la giardiasis, conocer la dinámica de la transmisión y posteriores medidas de control.
Referencia
Molina et al PCR amplification of triosephosphate isomerase gene of Giardialamblia in formalin-fixed feces. Rev LatinoamMicrobiol 2007; 49: 6-11.